光譜儀普通液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只需嚴(yán)厲依照操作請(qǐng)求停止操作，普通不會(huì)呈現(xiàn)問題，當(dāng)然啫喱需求特別指出的是關(guān)于液相的日常維護(hù)頤養(yǎng)很重要，比方活動(dòng)相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，假使不堅(jiān)持，很容易招致色譜柱梗塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不用要的毛病，糜費(fèi)時(shí)間其次，操作人員在配制液相剖析用樣品溶液時(shí)，最好由同一個(gè)人單獨(dú)完成，以免不用要的偶爾誤差。4.液相裝置環(huán)境：液相色譜儀應(yīng)盡量裝置于程度、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺(tái)面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處置系統(tǒng)分隔開，一個(gè)是避免色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個(gè)是為減少對(duì)人體的危害。各位小伙伴在實(shí)驗(yàn)分析中應(yīng)該都遇到過這類問題，在液相色譜中，對(duì)于組分復(fù)雜的樣品，采用一種色譜體系，往往很難得到理想的分離效果，要么分離時(shí)間太長，要么分離度太差。這種情況，采用梯度洗脫就可以縮短分析時(shí)間，提高分離效果。下面和大家分享一則梯度微調(diào)實(shí)例，一起感受下梯度微調(diào)對(duì)分離效果的奇妙影響吧。1、盡量在能長時(shí)間測(cè)試該項(xiàng)目的儀器上開發(fā)方法；2、需要了解系統(tǒng)的性能，避免出現(xiàn)儀器系統(tǒng)改變后不能重現(xiàn)的問題；3、要知道系統(tǒng)的兩個(gè)基本情況：梯度滯后體積和比例精確性。這可以在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)里得到這兩個(gè)數(shù)據(jù)：參考《JJG7052014液相色譜儀檢定規(guī)程》中《梯度誤差》實(shí)驗(yàn)：在B溶液（0.1%丙酮）后加紫外檢測(cè)器，設(shè)置一個(gè)多階層的梯度，B溶液以5%的幅度從0%變到100%，流速與平常一樣，流速為1mL/min。每段梯度大概保持5min。然后接二通運(yùn)行梯度，記錄圖譜。每段梯度設(shè)置的時(shí)間與實(shí)際發(fā)生的梯度時(shí)間之差就是梯度延遲時(shí)間，階層的高度可以用來測(cè)量流動(dòng)相比例，這些階層可能有點(diǎn)模糊，是由系統(tǒng)中混合體積造成的；4、檢測(cè)完系統(tǒng)，就可以按照它的性能來設(shè)計(jì)方法。
定硫儀一支注射器暫時(shí)不用時(shí)（比如下班），更要徹底清洗，否則殘留在其中的樣品可能將針芯粘牢，造成注射器報(bào)廢使用自動(dòng)進(jìn)樣器的用戶也應(yīng)注意此問題，zui好是經(jīng)常更換和清洗注射器。定期檢查并清洗進(jìn)樣口襯管儀器長期使用后，會(huì)發(fā)現(xiàn)襯管內(nèi)積有焦油狀物質(zhì)，這是樣品中不揮發(fā)成分造成的。此外還有顆粒狀物質(zhì)積存（隔墊碎屑，樣品中的固體物質(zhì)），這些都會(huì)干擾分析的正常進(jìn)行。因此要定期檢查，及時(shí)清洗。注意襯管中填充一些經(jīng)硅烷化處理的石英玻璃毛，即可提高樣品的汽化效率，又能防止隔墊碎屑進(jìn)入色譜柱造成堵塞。保留完整的儀器使用記錄這是儀器的履歷，應(yīng)逐日記錄，包括操作者、分析樣品及條件、儀器工作狀態(tài)等等。一旦儀器出現(xiàn)問題，這是查找原因的重要資料。工廠企業(yè)往往有嚴(yán)格的操作程序，這方面要做的好一些。有一些實(shí)驗(yàn)室有時(shí)不太注意這個(gè)問題，實(shí)在不是一個(gè)好的習(xí)慣。更換零部件要逐一進(jìn)行修理儀器時(shí)，不要一次更換多個(gè)部件，那樣會(huì)造成故障原因的判斷失誤。
甲烷分析儀從目前的售價(jià)看，四元低壓的泵比二元高壓的并低不了太多，但他們節(jié)約的成本是不少的四元低壓梯度系統(tǒng)采用單泵加梯度比例閥來實(shí)現(xiàn)，因?yàn)楸壤y是在泵前的，并且各流路的溶劑在比例閥里就混合在一起了，所以是泵前、低壓混合。一般地，對(duì)于常規(guī)分析來說，四元低壓梯度也可以滿足需要；如果分析樣品成份復(fù)雜、對(duì)重現(xiàn)性要求較高，或者需要在低流量下進(jìn)行梯度分析，還是選擇高壓梯度好一些。當(dāng)然，現(xiàn)在美國SSI（LabAlliance）公司推出的四元高壓梯度泵，在保證高精度分析的同時(shí)，也解決了流動(dòng)相數(shù)量受限制問題。液相色譜從性能上比較，四元高壓肯定優(yōu)于四元低壓。四元高壓的混合比例是通過改變泵的流速來獲得的，通常泵的流速都是很準(zhǔn)的，所以混合的精度也是很高的。四元低壓梯度的混合比例是通過控制不同流路的電磁閥的開閉時(shí)間長短來控制的，理論上混合的比例也是準(zhǔn)確的，但是實(shí)際上電磁閥的開閉會(huì)有一個(gè)延遲，無論它動(dòng)作多么快，總還是需要一點(diǎn)時(shí)間的。比如A路和B路各50%混合，在單位時(shí)間內(nèi)，A路和B路的電磁閥各開通50%的時(shí)間，這時(shí)問題不大，電磁閥的延遲影響可以通過調(diào)整補(bǔ)償系數(shù)來盡量彌補(bǔ)。但是如果極端一點(diǎn)的情況，A路99%，B路1%，這種情況下單位時(shí)間內(nèi)，A路的電磁閥開通99%的時(shí)間，B路只占1%，時(shí)間是很短的，這時(shí)B路電磁閥的延遲就影響很大了，甚至可能延遲的時(shí)間比工作的時(shí)間還要長。這是兩個(gè)管路的情況，假如四個(gè)管路同時(shí)工作，其結(jié)果可想而知。高壓梯度就不會(huì)存在這種問題了。
金屬過濾器檢查進(jìn)樣口、注射器、墊圈和色譜柱都正常，可就是不出峰，無意中發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣口柱頭壓達(dá)不到設(shè)定值，總是偏高，這時(shí)才懷疑是ECD檢驗(yàn)器出口不暢通由于ECD的排放物有一定的放射性，所以ECD出口是引到室外的。當(dāng)時(shí)是秋冬之交，雨水進(jìn)入到ECD排出口之后凍住了，因此造成儀器ECD的出口堵塞，柱頭壓居高不下，氣體在氣路中無法流動(dòng)，也就無法載樣品到檢測(cè)器，所以不出峰。安捷倫氣相色譜儀7890B 二、基線問題 氣相色譜儀基線波動(dòng)、飄移都是基線問題，基線問題可使測(cè)量誤差增大，有時(shí)甚至?xí)?dǎo)致儀器無法正常使用?！ ?、遇到基線問題時(shí)應(yīng)先檢查儀器條件是否有改變，近期是否新?lián)Q氣瓶及設(shè)備配件。 2、如果有更換或條件有改變，則要先檢查基線問題是不是由這些改變?cè)斐傻?，一般來說，這種變化往往是產(chǎn)生基線問題的原因。有些人在工作中就遇到過這種情形：新載氣純度不夠，換過載氣之后，基線逐漸上升（由于載氣凈化管的原因，基線不是馬上變化的）。第二天開機(jī)之后，基線非常高，并伴有基線強(qiáng)烈抖動(dòng)，所有峰都湮沒在噪音中，無法檢測(cè)。經(jīng)過檢查，問題出現(xiàn)在新?lián)Q的載氣上，重新更換載氣后，立即恢復(fù)了正常?！ ?、當(dāng)排除了以上可能造成基線問題的原因后，則應(yīng)當(dāng)檢查進(jìn)樣墊是否老化（應(yīng)養(yǎng)成定期更換進(jìn)樣墊的好習(xí)慣）； 4、石英棉是不是該更換了； 5、襯管是否清潔。值得一提的是，清洗襯管時(shí)可先用試驗(yàn)zui后定容的溶劑充分浸泡，再用超聲波清洗幾分鐘，然后放入高溫爐中加熱到比工作溫度略高的溫度，zui后再重新安裝。
高效金屬過濾器操作高效液相色譜儀的過程中可能遇到多種多樣的問題，遇到問題不可怕，主要在于我們?nèi)绾畏治鼋鉀Q問題，下面滕海儀器分享幾組高效液相色譜儀常見故障的處理操作液相色譜儀可能遇到壓力波動(dòng)大，峰分叉的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象是由于系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使兩者不能密封，這時(shí)我們需要注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼氯氣沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣，如果是單向閥與閥座之間有異物就得拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。當(dāng)液相色譜儀出現(xiàn)既無壓力指示也沒有液體流過該怎么辦呢？我們首先分析原因，出現(xiàn)這一現(xiàn)象無非兩種原因：大量氣泡進(jìn)入泵體或者泵密封墊圈磨損。如果是種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣；如果是第二種情況則需要更換密封墊圈。。
當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí)則過濾是必要的如前所述當(dāng)緩沖溶液放置一段時(shí)間（視環(huán)境溫度不同而異夏季一般不超過48h冬季一般不超過一周）后在使用前還應(yīng)重新過濾所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng).45μm（.22μm則更好）孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系二者不可混用以防止濾膜溶解而造成污染。裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換以避免濾器因過載而起不到過濾作用。3.凈化樣品當(dāng)樣品中含有對(duì)色譜柱有損害的化學(xué)成分如產(chǎn)生永久性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì)以及可能對(duì)柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。4.避免過高柱壓雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6psi（磅/平方英寸）但過高及過大的壓力變化均會(huì)縮短色譜柱的壽命避免的方法是（1）柱壓過高時(shí)盡可能采用較小的流速以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。（2）當(dāng)流速較大時(shí)應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。（3）使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過2%的壓力沖擊會(huì)很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時(shí)柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。
色譜柱每米降壓為75Kg/cm2以上高速——流速為0.1~10.0ml/min。高效——可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。高靈敏度——紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：?速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果。靈敏度高——紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
3、FID的靈敏度與氫氣、空氣和氮?dú)獾谋壤兄苯拥年P(guān)系，因此要注意優(yōu)化一般三者的比例接近或等于1：10：1，如氫氣30~40ml/min，空氣300~400ml/min，氮?dú)?0~40ml/min。另外，有些儀器設(shè)計(jì)有不同的噴嘴分別用于填充柱和毛細(xì)柱，使用時(shí)要查看說明書?！ ?、為防止檢測(cè)器被污染，檢測(cè)器溫度設(shè)置不應(yīng)底于色譜柱實(shí)際工作的高溫度。一旦檢測(cè)器被污染，輕則靈敏度下降或噪聲增大，重則點(diǎn)不著火。消除污染的辦法是清洗，主要是清洗噴嘴表面和氣路管道。具體辦法是拆下噴嘴，依次用不同的溶劑（丙酮、lv仿和乙醇）浸泡，并在超聲波水浴中超聲10min以上。還可用細(xì)不銹鋼絲穿過噴嘴中間的孔，或用酒精燈燒掉噴嘴內(nèi)的油狀物，以達(dá)到徹底清洗的目的。有時(shí)使用時(shí)間長了，噴嘴表面會(huì)積碳（一層黑色的沉積物），這會(huì)影響靈敏度?？捎眉?xì)紗紙輕輕打磨表面除去。清洗之后將噴嘴烘干，再裝在檢測(cè)器是進(jìn)行測(cè)定。
2.進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣器、各種進(jìn)樣口和氣化室，樣品由進(jìn)樣器注入氣化室，在氣化室高溫作用下瞬間氣化，然后在載氣的攜帶下進(jìn)入與氣化室相連的色譜柱中3.分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)由色譜柱組成，它是色譜儀的核心部件，其作用是分離樣品，色譜柱主要有兩類:填充柱和毛細(xì)管柱。色譜柱由色譜柱管、柱內(nèi)填充物等組成。柱管一般采用金屬管或玻璃管，色譜柱在恒溫柱箱內(nèi)工作。4.控制系統(tǒng)控制系統(tǒng)主要的任務(wù)有:控制所有的溫度及時(shí)間程序、控制各種檢測(cè)器（（FIDNPD和FPD）的自動(dòng)點(diǎn)火、色譜圖的保存與再處理、樣品分析條件的保存、程序升溫、開/關(guān)檢測(cè)器、分渝不分流進(jìn)樣器的時(shí)間等。5.檢測(cè)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)樣品經(jīng)過色譜柱分離后，各成分按保留時(shí)間不同，順序地隨載氣進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)器把進(jìn)入的組分按時(shí)間及其濃度或質(zhì)量的變化，轉(zhuǎn)化成易于測(cè)量的電信號(hào)，經(jīng)過必要的放大傳遞給記錄儀或工作站，后得到該混和樣品的色譜流出曲線及定性、定量曲線，即色譜圖。所使用的檢測(cè)器主要有以下幾種:火焰離子化檢測(cè)器FID（FlameIonizationDetector）、熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD（ThermalConductivityDetector）、電子俘獲檢測(cè)器ECD（ElectronCaptureDetector）氮磷檢測(cè)器NPD（NitrogenPhosphorDetector）、火焰光度檢測(cè)器FPD（FlamePhotometricDetector）、質(zhì)譜檢測(cè)器MSD（MassSpectrometryDetector），本文主要介紹TCD和FID兩種檢測(cè)器（1）熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD（ThermalConductivityDetector），其基本原理是每種物質(zhì)都有導(dǎo)熱能力，而且導(dǎo)熱的能力大小不同，通過一個(gè)熱敏電阻來測(cè)定與熱敏電阻接觸的氣體組成變化情況。這種檢測(cè)方式雖然不是靈敏的，但是對(duì)所有樣品都有響應(yīng)，是通用型的檢測(cè)器。（2）火焰離子化檢測(cè)器FID（FlameIonizationDetector）一般用的是氫火焰，其原理是在氫氣燃燒時(shí)，在火焰的上方會(huì)有一個(gè)溫度很高的區(qū)域，樣品在這個(gè)區(qū)域被離子化，形成一些正負(fù)離子，在火焰的周圍加上一個(gè)電場(chǎng)，讓離子定向移動(dòng)，形成電流，經(jīng)過一系列放大后得到放大信號(hào)，也就是檢測(cè)到的信號(hào)。FID只對(duì)有機(jī)化合物有響應(yīng)，為選擇性的檢測(cè)器。但是它的靈敏度較高，應(yīng)用為廣泛，一般儀器上都是配雙柱雙氣路雙檢測(cè)器，單柱抗干擾能力差，穩(wěn)定時(shí)間長，雙柱的干擾一正一負(fù)正好抵消。
安裝新的密封圈后，進(jìn)行zui初的ldquo，磨合期在至少350bar的反壓下泵入異丙醇15-30分鐘。這要通過使用原來的色譜柱或陰尼管線來產(chǎn)成壓力.。杭州森尼歐提供液相色譜儀色譜柱的選擇指南 現(xiàn)代液相色譜儀色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解。一、硅膠基質(zhì)填料：1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團(tuán)如胺基團(tuán)（NH2APS）和氰基團(tuán)（CNCPS）的鍵合相填料?！ ∮捎诠枘z表面的硅羥基（SiOH）或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。 正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（MethyleneChloride）等。2、反相色譜 反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物?！ 悠妨鞒錾V柱的順序是極性較強(qiáng)的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
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